Innehåll
- Huvudskillnad
- Södra blotting mot. Western Blotting
- Jämförelsediagram
- Vad är Southern Blotting?
- Vad är Western Blotting?
- Viktiga skillnader
- Slutsats
Huvudskillnad
Huvudskillnaden mellan Southern Blotting och Western Blotting är att Southern Blotting är en teknik som används för att detektera ett specifikt DNA-fragment i ett givet prov medan Western Blotting används för att ta reda på ett specifikt protein i ett givet prov.
Södra blotting mot. Western Blotting
Blotting är en teknik som används av forskare för att separera olika typer av molekyler från en blandning eller prov. I denna teknik rör sig makromolekyler som nukleinsyror (DNA och RNA) och proteiner i en blandning genom en gelplatta. Här kommer småpartiklar att röra sig snabbare än de större. Dessa molekyler pressas mot ytan av ett immobiliserat membran som överför molekylerna till membranet. Det finns olika typer av blotting på basis av detektion av specifikt material, dvs sydlig blotting, nordlig blotting och western blotting. Södra blotting är den typ av blotting som används för att upptäcka DNA medan western blotting används för att ta reda på protein. Southern blotting utvecklades av Edward M. Southern 1975. Så det är känt som Southern blotting. Å andra sidan utvecklades western blotting av George Starks grupp vid Stanford University 1979. Detta namn användes för att matcha med sydlig blotting. Södra blotting används för att ta reda på en specifik DNA-sekvens medan western blotting används för att ta reda på en specifik aminosyra eller proteinsekvens.
Jämförelsediagram
| Södra blotting | Western Blotting |
| En teknik som används för att ta reda på en specifik DNA-sekvens i en given blandning kallas sydlig blotting. | En teknik som används för att ta reda på en specifik aminosyrasekvens för proteinet i en given blandning kallas sydlig blotting. |
| Utvecklad av | |
| Southern blotting utvecklades av Edward M. Southern 1975. | Western blotting utvecklades av George Starks grupp vid Stanford University 1979. |
| Typ av upptäckt | |
| Södra blotting används för att ta reda på en specifik DNA-sekvens. | Western blotting används för att ta reda på en specifik aminosyra eller proteinsekvens. |
| Princip | |
| Det fungerar på principen om hybridisering. | Det fungerar enligt principen om immundetekteringsmetod eller antigen-antikroppinteraktion. |
| Sond | |
| Ett enkelsträngat DNA eller ibland RNA används som sond. | Primära och sekundära antikroppar används som sond. |
| Gelelektrofores | |
| Agarosgelelektrofores används i sydlig blotting. | SDS PAGE / Polyakrylamidgel används för att separera proteiner i western blotting |
| Blottingförfarande | |
| Södra blotting följer proceduren för kapilläröverföring. | Western Blotting följer proceduren för elektrisk överföring. |
| Prov | |
| Under den södra blotting måste provet denatureras. | Under västlig blotting bör provet vara i sitt ursprungliga tillstånd. |
| Blockering | |
| Inget något steg som blockering är involverat i södra blotting. | Under västlig blotting blockeras icke-specifika antikroppsställen på nitrocellulosapapperet med hjälp av mjölkpulver eller bovint serumalbumin (BSA). |
| Märkningsmetoder | |
| Vanliga märkningsmetoder som används vid sydlig blotting är användning av kromogena färgämnen eller radiomärkning eller lysrörsmärkning etc. | Märkningsmetoder som används vid western blotting är användning av fluorescerande märkt antikropp eller radiomärkning, kromogena färgämnen eller bildning av diaminobenzidin etc. |
| Detektionsmetoder | |
| Detektering av ljus, Autoradiograf och färgförändringar används som detekteringsmetoder i södra blotting. | Detektionsmetoder i western blotting är förändringar i färg och detektering av ljus etc. |
| Ansökan | |
| Södra blotting används för DNA-upptäckt, faderskapstest, DNA-fingring, för identifiering av offer, för att identifiera brottslingar, för att hitta smittämnen och för att identifiera mutation eller genarrangemang, etc. | Western blotting används för att hitta antalet proteiner i en blandning, för att upptäcka närvaron av HIV, virus och bakterier etc. i serum, för att ta reda på defekta proteiner och används som en bestämd åtgärd för herpes, hepatit B, Lyme sjukdom och Creutzfeldt-Jacob-sjukdom, etc. |
Vad är Southern Blotting?
Södra blotting är den äldsta blottingmetoden som gavs av Edwin Southern alltså, benämnd som sydlig blotting. Det används för att ta reda på en specifik sekvens av DNA i ett visst prov eller blandning. Steg involverar under sydlig blotting är elektrofores, överföring och detektion av specifika sekvenser. Först och främst fragmenteras DNA med hjälp av specifikt restriktionsenzym. Därefter separeras önskade DNA-fragment genom gelelektrofores. Dessa fragment denatureras med hjälp av en alkalisk lösning, t ex NaOH, etc. för att separera de två DNA-strängarna. Dessa enkelsträngade DNA-fragment överfördes sedan på ett membran genom blottingprocessen. Detta membranbundna DNA behandlas sedan med en märkt sond. Denna sond kommer att fästa vid sin komplementära sträng på membran-DNA som kan visualiseras med autoradiogram etc.
Vad är Western Blotting?
Western blotting-metoden uppfanns av George Starks grupp vid Stanford University som används för att identifiera en specifik aminosyrasekvens i proteinet. Det är också känt som protein blot eller immunblotting. Stegen under western blotting är elektrofores, överföring och detektion av specifika proteiner. Först av allt, homogenisera blandningen. Sedan separera molekylen av intresse med hjälp av elektrofores. Överför dessa molekyler på membranet och identifiera det specifika proteinet med hjälp av specifik sond.
Viktiga skillnader
- En teknik som används för att ta reda på en specifik DNA-sekvens i en given blandning är känd som sydlig blotting medan en teknik som används för att ta reda på en specifik aminosyrasekvens av proteinet i en given blandning kallas sydlig blotting.
- Södra blotting utvecklades av Edward M. Southern 1975, så kallad sydlig blotting. Å andra sidan utvecklades western blotting av George Starks grupp vid Stanford University 1979.
- Södra blotting används för att ta reda på en specifik DNA-sekvens. Omvänt används western blotting för att ta reda på en specifik aminosyra eller proteinsekvens.
- Södra blotting fungerar enligt principen om hybridisering på baksidan; western blotting fungerar enligt principen om immunodetektionsmetod eller antigen-antikroppinteraktion.
- Ett enkelsträngat DNA eller ibland RNA används som en sond i sydlig blotting på andra sidan, i västra blotting används primära och sekundära antikroppar som en sond.
- Agarosgelelektrofores används i sydlig blotting medan SDS PAGE / Polyakrylamidgel används för att separera proteiner i western blotting.
- Södra blotting följer å andra sidan kapilläröverföringsproceduren; western Blotting följer proceduren för elektrisk överföring.
- Under sydlig blotting måste provet denatureras, medan provet under västlig blotting bör vara i sitt ursprungliga tillstånd.
- Inget något steg som blockering är involverat i sydlig blotting på baksidan, under western blotting blockeras icke-specifika antikroppsställen på nitrocellulosapapperet med hjälp av mjölkpulver eller bovint serumalbumin (BSA).
- Vanliga märkningsmetoder som används vid sydlig blotting är användning av kromogena färgämnen eller radiomärkning eller fluorescerande märkning etc. medan, märkningsmetoder som används i western blotting är användning av fluorescerande märkt antikropp eller radiomärkning, kromogena färgämnen eller bildning av diaminobenzidin etc.
- Detektering av ljus, Autoradiograf och färgändringar används som detekteringsmetoder i sydlig blotting, medan detekteringsmetoder i western blotting är förändringar i färg och detektering av ljus, etc.
- Södra blotting används för DNA-upptäckt, faderskapstestning, DNA-fingring, för identifiering av offer, för att identifiera brottslingar, för att hitta smittämnen och för att identifiera mutation eller genarrangemang. Omvänt används western blotting för att hitta antalet proteiner i ett blandning, för att upptäcka närvaron av HIV, virus och bakterier, etc. i serum, för att ta reda på defekta proteiner och användas som en bestämd åtgärd för herpes, hepatit B, Lyme-sjukdom och Creutzfeldt-Jacob-sjukdom, etc.
Slutsats
Ovanstående diskussion sammanfattar att sydlig blotting är den äldsta blottingtekniken som används för att ta reda på specifikt DNA-segment i ett prov medan western blotting upptäcktes senare och användes för att identifiera en specifik sekvens av aminosyror eller ett specifikt protein.
